2008, 24(7):725-730.
摘要:
环介导等温扩增（1oop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一种在等温条件下高特异、高效、快速地扩增靶序列的DNA扩增新技术。以沙门菌（Salmonella spp.）为研究对象，根据其特异性的invA基因，设计了一套特异性引物对该基因进行了LAMP，同时优化了其反应条件，建立了沙门菌的LAMP快速检测技术。结果表明，LAMP的最佳反应条件为外引物浓度5 pmol/L、内引物浓度40 pmol/L，Mg2＋浓度6 mmol/L，dNTP浓度0.8 mmol/L，甜菜碱浓度0.8 mmol/L，Bst DNA聚合酶8 U，反应温度63 ℃，反应时间1 h。在此条件下，LAMP检测沙门菌DNA的敏感度达10 fg/反应，且与其他常见的细菌无交叉反应。其对牛奶样品的检出量为102 cfu/mL，适合于食品中污染沙门菌的快速检测。
