摘要:
副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一种常见的食源性致病菌，在海鲜等食物中检出率很高，食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品，极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌，容易出现假阳性结果。本研究基于DNA结合染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide, PMA），利用荧光染料钙黄绿素（Calcein）的特性，建立了一种实时的可视化环介导等温扩增方法（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP），并与qPCR方法进行比较。实时可视化LAMP方法的反应结果，既可以肉眼直接观测，也可以借助荧光分析设备实时监测，并对半定量分析进行初探，为之后向定量分析深入研究打下基础。实验结果表明，实时可视化PMA-LAMP方法的灵敏度可达5.0×102 CFU/mL，模拟食样灵敏度为1.9×102 CFU/mL，与PMA-qPCR方法结果一致。除去前增菌时间，整个检测过程只需2 h，且准确率高，为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。
