柚作为芸香科柑橘属水果，不仅具有较高的营养价值，而且具有较高的药用价值[1]。柚皮占整个柚子的43%～48%，含有大量有益于人体健康的非营养生理活性成分，如酚类化合物、类黄酮、多糖、类柠檬苦素、香精油、天然色素、膳食纤维等含量均高于柚子果实[2]。柚子是人们喜爱的水果之一，不但清香、酸甜、凉润，还具有显著的营养和健康促进作用，这与其含有的天然活性物质密切相关。
类黄酮化合物是存在于植物中的一种天然物质，由于生物活性强，毒副作用小，被广泛应用于医药和食品领域，成为国内外天然药物和保健产品的研究热点。柑橘类黄酮一般分为：黄酮、黄烷酮、黄酮醇、异黄酮、花青素和黄烷醇[3]。黄酮类物质种类丰富，多甲氧基黄酮（Polymethoxy Flavones，PMFs）是柑橘种属中特有的一种黄酮类化合物，具有更多的甲氧基，当接近癌细胞并进入癌细胞时具有更高的疏水性，使其具有更强的生物活性[4]，也是更好的脂溶性物质。不同种质间PMFs 含量差异显著，39 份宽皮柑橘种质果皮中PMFs 的总质量分数变化范围为15.81～3 660.94 mg/kg（以鲜质量计）[5]，目前对于柑橘种属中PMFs 的研究主要集中在清见蜜柑、陈皮、锦橙皮等。对于柚皮PMFs 提取物的成分及抗氧化活性尚不清楚。
柚子盛产于南方，广东、广西、福建三省是国内柚子的主产区，近几年来国内柚子年产量高达近500 万t。柚子主要用于鲜销，柚皮中许多活性成分无法合理利用，导致资源浪费和环境污染[6]。本研究将提取柚皮PMFs，制备型高效液相色谱制备分离柚皮PMFs 物质，利用超高效液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）分析柚皮PMFs 类物质，得到主成分；测定不同质量浓度柚皮PMFs 提取物对清除DPPH 自由基、ABTS+自由基、红细胞溶血率取的影响，并研究柚皮PMFs 对高温下油炸饼中油脂抗氧化稳定性的影响，以期对提高柚皮副产物综合利用率、开发出柚皮基天然抗氧化剂提供指导。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
柚子来源于广东省梅州市五华县金柚种植园。食用级大豆油，中粮粮油工业有限公司。甲醇、乙腈、甲酸，均为色谱纯，美国天地公司；无水乙醇、茴香胺试剂、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-二氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、过硫酸钾、2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐AAPH、氢氧化钾、碘化钾、可溶性淀粉、石油醚30～60 ℃、乙酸、异辛烷，均为分析纯，上海阿拉丁有限公司。
1.2 仪器与设备
RΕ-52AA 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SCIΕNTZ-18 ND 型冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司；P3500 制备型液相色谱，依利特（苏州）分析仪器有限公司；Waters I class 液相色谱串联Q-Tof质谱，美国Agilent 公司；Infinite M1000 Pro 型酶标仪，TΕCAN 公司；HYG-C 型培养箱，苏州培英实验设备有限公司；JP-020 超声波，深圳市洁盟清洗设备有限公司。
1.3 方法
1.3.1 多甲氧基黄酮的提取及富集
在清洁和去除杂质后，剥去柚子皮。将柚皮精选洗净，切成1～2 cm 大小的小块，在60 ℃烘箱中烘干，磨粉，过80 目筛。根据赵梓燕[7]的方法提取柚皮PMFs：在41 ℃的温度下，用90%的乙醇/水溶液作为溶剂（料液比为1:20）进行超声辅助提取，单次提取时间34 min，提取两次。采用HPD300 型大孔树脂富集纯化柚皮PMFs，上样质量浓度为10.00 mg/mL，上样流量为4.00 BV/h，上样体积为11 BV；用体积分数7%的乙醇溶液初步洗脱6 BV 进行除杂，然后用90%乙醇/水（V/V）溶液以4.00 BV/h 的流量洗脱，洗脱5 BV，最后旋转蒸发去除乙醇，冷冻干燥得到柚皮PMFs 粗提物。
1.3.2 提取物得率计算公式
式中：
Y——得率，%；
m1——提取物干质量，mg；
m0——原料干质量，mg。
1.3.3 制备型高效液相色谱制备分离PMFs
参考文献方法[7]，将柚皮多甲氧基黄酮提取物充分溶解后上样于制备液相，色谱柱：美国沃特斯Symmetry Prep C18柱（300 mm×7.80 mm，10 μm）；流动相：A 相，0.10%甲酸/乙腈；B 相，0.10%甲酸/水；流速为20 mL/min；洗脱梯度：0～6 min，82%～70% B；6～35 min，70%～58% B；35～45 min，58%～40% B；45～50 min，40%～82% B；流速为20 mL/min。流动相使用前需经0.45 μm 微孔滤膜抽滤，超声脱气；进样量为0.65 mL；柱温为30 ℃；检测波长为330 nm。收集峰面积最大的组分。
1.3.4 主要PMFs 组分的HPLC/MS 分析
液相色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC® BΕH C18 1.7 μm（2.1 mm×100 mm）；流动相为0.10%甲酸水（A2）-0.1%甲酸乙腈（B2）。洗脱梯度：0～1 min，80% A2；1～9 min，80%～50% A2；9～12 min，50%～2%A2；12～13.50 min，2% A2；13.5～14 min，2%～80% A2；14～17 min，80% A2。柱温40 ℃，进样量：0.002 mL；紫外检测波长扫描范围为200～400 nm。
质谱条件：使用电喷雾离子源（ΕSI），正负离子模式，正离子喷雾电压为3.50 kV，负离子喷雾电压为2.50 kV，质谱鞘气流量20 mL/min，辅助气6.67 mL/min。毛细管温度325 ℃，以分辨率70 000进行全扫描，扫描范围150～1 000。
1.3.5 对DPPH 自由基的清除作用
参照魏鑫悦等[8]方法并稍作修改。配制0.25、0.50、1、1.50、2 mg/mL 的柚皮PMFs 溶液，以Vc 溶液（相同质量浓度）为对照，在试管中加入4 mL 提取液及4 mL 的0.20 mmol/L DPPH 溶液，混匀后于暗处反应30 min，测定517 nm 波长下吸光度（A0）；4 mL 无水乙醇和4 mL DPPH 溶液，混匀后于暗处反应30 min，在517 nm 处测定吸光度（A2）；测定不同浓度4 mL样品溶液和4 mL 无水乙醇的吸光度（A1）。
式中：
C1——DPPH 自由基清除率，%；
A0——提取液+DPPH 溶液的吸光度值；
A2——无水乙醇+DPPH 溶液的吸光度值；
A1——样品溶液+无水乙醇的吸光度值。
1.3.6 对ABTS+自由基的清除作用
按Zhang 等[9]的方法并稍作修改。用去超纯水制备7 mmol/L 的ABTS 与2.45 mmol/L 的K2S2O8等体积混合。将混合物置于室温下黑暗12 h，用无水乙醇稀释至734 nm 处的吸光度为（0.70±0.01）。分别取2 mL 不同质量浓度（0.25、0.50、1、1.50、2 mg/mL）的样品加入8 mL 上述混合液，摇匀，于室温下暗反应8 min 后在734 nm 波长下测吸光度（Aj）；用无水乙醇代替样品测吸光度（Ai）。用Vc 替代样品作为对照。
式中：
Ai——用无水乙醇代替样品的吸光度；
Aj——不同质量浓度的样品加入ABTS 混合液在734 nm 波长下的吸光度；
C2——ABTS+自由基清除率，%。
1.3.7 对红细胞溶血率的测定
参照刘袆帆等[10]的方法，用PBS 溶解样品，制备质量浓度分别为0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.00 和1.5 mg/mL 的待测液，红细胞悬浮液在低温下以3 000 r/min 的速度离心10 min 去除悬浮液，添加适量PBS 溶液并在相同条件下离心洗涤3 次后去除上清液，再用4 倍的PBS 稀释红细胞悬浮液。
正常组：0.40 mL PBS 加入0.40 mL 的红细胞悬浮液，在37 ℃下孵育30 min。然后添加0.60 mL PBS孵育2 h，最后加入6.40 mL PBS 并在4 ℃下以3 000 r/min 的速度离心10 min。
全溶血组：以蒸馏水代替PBS 按上述进行相同的处理。
AAPH 组：在0.40 mL 的红细胞悬浮液中加入0.40 mL PBS，在37 ℃下孵育30 min。然后加入0.80 mL AAPH，在37 ℃下孵育2 h，最后加入6.40 mL PBS，4 ℃下以3 000 r/min 离心10 min。
AAPH 诱导的样品组：在0.40 mL 的红细胞悬浮液中加入0.40 mL 不同浓度的样品，在37 ℃下孵育30 min。然后加入0.80 mL 0.40 mmol/L 的AAPH，在37 ℃下孵育2 h，最后加入6.40 mL PBS 并在4 ℃下以3 000 r/min 离心10 min。
分别取正常组、AAPH 组、样品组的上清液在540 nm 处测吸光值（A），取全溶血组的上清液测吸光值（B）。溶血率（%）按以下公式计算：
式中：
H——溶血率，%；
A——正常组、AAPH 组、样品组的上清液的吸光值；
B——全溶血组的上清液的吸光值。
1.3.8 对油饼抗氧化性稳定性的影响
以面粉质量计算，分别加入其质量分数0.05%、0.10%、0.25%、0.50%、1%的柚皮PMFs 提取物，与面粉充分混匀做成饼，以空白组作对照。取一定量的油在180 ℃的油温下连续加热5 h，在此期间每隔1 h加入面饼，煎炸10 min 后捞出。然后将油饼切成小块于广口瓶中，加入样品体积2～3 倍的30～60 ℃石油醚，混匀，静置浸提1 h 以上，过滤后，并于35 ℃水浴中旋转蒸发去除有机溶剂，残留油脂即为待测样品。测定1、2、3、4 和5 h 油饼中油脂的过氧化值、酸价和茴香胺值（Anisidine Value，AV）分别参照GB 5009.227-2016 滴定法、GB 5009.229-2016 冷溶剂指示剂滴定法和GB/T 24304-2009《动植物油脂茴香胺值的测定》，每组测3 次取平均值。
1.4 数据分析
使用SPSS 25.0对实验数据进行单因素方差分析，实验表示为平均值±标准差（mean±SD），以Duncan多边检验对实验均值进行差异显著分析（P＜0.05）。用Origin 2018 对分析数据作图。
2 结果与分析
2.1 柚皮提取物得率计算
柚皮经提取及富集后，提取物得率为4.12%。
2.2 柚皮中PMFs 的制备及化合物种类分析
图1 为柚皮PMFs 提取物的制备色谱图，使用乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，分离各目标化合物。
图1 柚皮PMFs 的制备液相色谱图
Fig.1 Chromatographic diagram of preparation of pomelo peel polymethoxy flavonoids
如图1 所示，经梯度洗脱后的柚皮PMFs 共有17个明显的尖峰。其中，1.09～17.11 min 的峰面积为1 017 258.80，标记为峰A。收集峰A，冻干后得到PMFs化合物。
金柚柚皮PMFs化合物经LC-MS分析后发现共有27 种物质，主要包括查尔酮类4 种、碳苷类1 种，类黄酮22 种。其中类黄酮物质相对含量最高为73.64%，类黄酮物质中，黄酮和黄烷酮含量相对较高，分别为47.07%和19.43%；黄酮中含有的PMFs 类物质有5 种分别为川陈皮素、橘皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮和 5-羟基-3,3',7,8-四甲氧基-4',5'-亚甲二氧基黄酮，含量分别为5.12%、4.29%、4.33%、4.10%和3.07%。详细结果如表1 所示。
表1 PMFs 化学成分鉴定表
Table 1 Identification table of chemical composition of polymethoxy flavonoids
续表1
续表1
如表1 所示，柚皮PMFs 化合物中类黄酮物质含量为73.64%。柑橘类黄酮是多酚类化合物的次生代谢产物，主要存在于柑橘属果实的皮、肉、籽中，通常皮含有更多的类黄酮，它们有一个共同的基本骨架，包括两个芳香环（A 环和B 环）和一个吡喃环（C 环）（图2a）[11]。C6-C3-C6 基本骨架被不同位点和数量的羟基、甲氧基、糖苷等官能团取代，构成了类黄酮的多样性和多同分异构性[12]。国内外研究表明，柑橘属类黄酮具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗高血压、降血脂、保护心脏、预防动脉粥样硬化、抗菌等活性[13]。
图2 柚皮类黄酮化合物中类黄酮骨架（a）、川陈皮素（b）、橘皮素（c）、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮（d）、5-羟基-3,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮（e）的结构式
Fig.2 The structural formulas of flavonoids,flavonoid skeleton(a),Nobiletin (b),Tangeretin (c),3,5,6,7,8,3',4'-heptamethoxyflavone (d),5-Hydroxy-3,6,7,8,3',4'-hexamethoxyflavone (e) in pomelopeel
如表1 所示，柚皮中PMFs 含量为20.91%。以间苯二酚为原料，经过八步反应合成了柑橘皮中常见的类黄酮化合物，如川陈皮素、橘皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮等，虽然它们的含量不高，但其生物活性高于普通类黄酮化合物，因此受到了更多的关注。川陈皮素结构式如图2b 所示，黄酮核上有六个甲氧基，分布于A 环的5、6、7、8 位和B 环的3'、4'位，具有抗氧化、抗癌、抗炎、调节脂质代谢等多种活性。王景翔等[14]研究了陈皮提取物黄酮类化合物（主要是川陈皮素）总抗氧化能力、对有机自由基、羟自由基的抑制与提取物黄酮类化合物浓度有很强的量效关系。柑橘中的川陈皮素具有很高的清除自由基和抗脂质过氧化的活性，可以对抗大多数代谢性疾病中脂质氧化，在糖尿病大鼠中，心脏抗氧化酶如SOD、CAT、GPx 和GR 显著降低，并在川陈皮素治疗后显著恢复正常[15]。研究表明川陈皮素能强烈对抗新陈代谢以时钟基因依赖的方式出现综合症，饮食诱导肥胖在小鼠中，川陈皮素提高了时钟蛋白水平，并引起显著的反应，通过直接激活维甲酸重建基因表达受体相关的孤儿受体。研究表明50、200 mg/kg 柑橘皮提取物中分别含13.50、54.00 mg/kg 川陈皮素，处理胆管结扎雄性ICR 小鼠（5～6 周龄），4 周后血浆中IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、AMPK 等促炎细胞活性明显降低，说明柑橘皮提取物对胆汁淤积症具有抗炎作用[16]。在体外和体内进行的大量研究表明，川陈皮素及其衍生物在不同细胞和分子水平上具有成为有效癌症化学预防剂的巨大潜力[17]。橘皮素结构式如图2c 所示，含有5个甲氧基。研究表明橘皮素明具有多种药理活性，包括抗炎、抗氧、抗癌、抗代谢失调、神经保护等[18]。Li等[19]评估了橘皮素在牛II型胶原诱导的关节炎大鼠中的抗氧化和抗炎特性；结果表明，橘皮素上调NF-2信号通路，从而抑制氧化应激和炎症。Miyata 等[20]经实验发现橘皮素可以降低小鼠前脂肪细胞系3T3-L1 上的细胞内甘油三酯。
研究表明3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮具有一定的抗肿瘤、抗氧化的作用[21]，其结构式如图2d，含有7个甲氧基。胡燕飞等[22]从柑皮低极性部分中分离得到3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮，可抑制白血病细胞的生长。评估了柑橘果皮分离的所有化合物对RANKL 诱导的BMM 破骨细胞生成受体激活剂的抑制作用，结果表明，3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮通过抑制RANKL介导的c-Fos 信号传导减弱破骨细胞分化，此外，它可能在治疗或预防骨吸收相关疾病方面具有治疗潜力，如骨质疏[23]。
研究表明5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮参与人AGS 癌细胞中死亡受体相关凋亡介质的诱导[24]；有研究显示其有抗HIV-1 的活性并抑制HIV-1 逆转录酶[25]；研究表明其可通过p53 和BAX 依赖性方式诱导细胞凋亡和细胞周期停滞[26]。
柚皮PMFs 具有多种活性物质，推测PMFs 具有良好的抗氧化活性，这为下一步柚皮PMFs 抗氧化模型评价奠定了基础。
2.3 柚皮PMFs 抗氧化活性的测定
2.3.1 不同浓度对柚皮PMFs 提取物抗氧化活性的影响
DPPH 自由基是一种合成的稳定的自由基。PMFs溶液和Vc 可提供与DPPH 自由基结合的电子，减少DPPH 自由基，从而改变溶液的颜色和吸光度。由图3a 可以看出，在0.25～1.50 mg/mL 的PMFs 溶液范围内，DPPH 自由基的清除率为41.22%～72.58%，清除能力逐渐增强并迅速增加；2.00 mg/mL 的PMF 清除率最大为75.90%。而Vc 对DPPH 自由基清除能力较稳定2.00 mg/mL 的Vc 清除率最大为74.17%，略低于PMFs。在低浓度下，柚皮PMFs 和Vc 的清除率相差较大，但随着浓度的增加差异逐渐减小。总的来说，柚皮PMFs 对自由基也有很好的清除能力。研究表明，柑橘皮黄酮提取物具有抗氧化特性，是清除自由基的天然成分[27]。
图3 柚皮PMFs 提取物浓度对抑制DPPH 自由基（a）、ABTS+自由基（b）和红细胞溶血率（c）的影响
Fig.3 Effects of PMFs extract concentration on inhibition of DPPH free radical (a),ABTS free radical (b) and hemolysis rate of red blood cells (c) in pummelo peel
注：图上字母不同表示组间差异显著（P＜0.05），下同。
ABTS 与过二硫酸钾反应可以生成绿色的ABTS+自由基，其最大吸收波长为734 nm，其浓度可通过测量734 nm 处的吸光度来确定。在ABTS 溶液中添加该物质后，如果溶液褪色且在734 nm 处吸光度降低，则该物质具有抗氧化能力。如图3b 可知，在0.25～1.50 mg/mL 的PMFs 溶液范围内，其ABTS+自由基清除率显著提高，而当PMFs 浓度为0.50～2.00 mg/mL时，对ABTS+自由基清除能力没有显著差异，此时大多数自由基可能已被清除，2.00 mg/mL 柚皮PMFs 对ABTS+自由基清除率最大为78.85%。在试验的浓度范围内，Vc 对ABTS+自由基的清除能力更强，这可能是由于多种PMFs 的拮抗作用，削弱了PMFs 清除ABTS+自由基的能力[28]。
红细胞在APPH 作用下产生大量的自由基，其细胞膜表面含有多种不饱和脂肪酸，容易引起脂质过氧化现象，破坏细胞膜的完整性，导致溶血。一些抗氧化剂，如黄酮和多酚等可以保护细胞膜免受损伤，并抑制溶血现象的产生[29]。因此，通过模拟AAPH 引起的红细胞损伤，研究了PMFs 对红细胞的保护功能和抗氧化活性。如图3c 所示，样品组的溶血率与AAPH组相比有显著差异，经不同浓度的PMFs 处理后，溶血率降低了13.75%～31.31%，其中0.05 mg/mL 的PMFs 的溶血率最低，达到48.89%，表明PMFs 对氧化应激的红细胞具有保护作用。然而，PMFs 浓度的增加会降低对红细胞的保护作用，其中的机制需要进一步实验探索。在纳雨农等[30]的研究中，金柚柚果黄酮具有一定的自由基清除能力，可以缓解AAPH 诱导的红细胞氧化应激，且主要通过非酶促抗氧化体系清除自由基。
综上所述，柚皮PFMs 其具有一定的抗氧化活性。结果与千里香中PFMs 具有抗氧化活性一致[31]。
2.3.2 对油饼抗氧化性稳定性的影响
过氧化值、酸价是评价油脂质量的重要指标[32]。过氧化值是测定油脂氧化初期的指标，酸价是测定脂肪酸等化合物中羧酸根的含量，随着贮藏期的延长和油脂的酸败，过氧化值、酸价也呈上升趋势。由图4可知，180 ℃下随着油炸时间的延长，各组样品的过氧化值和酸价逐渐增加。与空白组相比，添加不同浓度的PMFs 提取物对油饼中的油脂氧化都有一定的延缓作用，其添加水平与油脂的抗氧化能力存在量效关系，这可能与柚皮PMFs 总的纯度及其含有PMFs 的种类有关。空白组油饼中油脂的过氧化值和酸价的变化量分别为（过氧化值0.16～0.28 g/100 g，酸价0.36～1.42 mg/g），而添加1.00%柚皮PMFs 提取物的理化指标变化量较小（过氧化值0.15～0.19 g/100 g，酸价0.34～1.25 mg/g）。如图4a 所示，在相同煎炸时间和相同添加物的不同添加水平下，在3、5 h 时，0.05%、0.10%的添加量之间没有显著差异，而高浓度的添加量0.50%、1.00%的抗氧化能力显著优于低浓度下的抗氧化能力。如图4b 所示，在1、3 h 时，1.00%和0.50%、0.25%和0.10%的添加量之间没有显著差异。有研究表明，柚皮中的总黄酮可以提高食用油的抗氧化能力，并显著延缓油脂氧化变质[33]。单杨等[34]研究了PMFs单体的抗氧化功能，结果表明PMFs 具有一定的抗亚油酸氧化能力。
图4 180 ℃连续加热煎炸5 h 条件下油饼中油脂过氧化值（a)和酸价（b)随时间的变化比较
Fig.4 Comparison ofoil peroxide value (a) and acid value (b) of oil cake with time under continuous heating and frying for 5 h at 180 ℃
茴香胺值反映了油脂中非挥发的次级氧化产物，是脂肪酸氢过氧化物特别是油脂中非挥发性醛含量的一个指标[35]。柚皮PMFs 提取物对油饼中油脂产生醛类的影响见图5，空白组油样产生的醛类化合物含量随着煎炸时间的增加而增加，PMFs 能降低油脂AV 增长速度，并导致AV 明显增加、减少、再增加的趋势。这是正常现象，抗氧化剂导致AV 明显呈上升、下降、再上升的波浪式上升结果[36]。添加柚皮PMFs 提取物可有效抑制醛类化合物产生，与空白组（茴香胺值4.49～7.08）相比，添加面粉质量的0.50%柚皮PMFs（茴香胺值0.91～5.50）使油脂AV 明显下降。
图5 180 ℃连续加热煎炸5 h 条件下油饼茴香胺值随时间的变化比较
Fig.5 Comparison of anisidine value of oil cake with time under the condition of continuous heating and frying at 180 ℃ for 5 h
3 结论
本研究以金柚柚皮为对象，采用制备液相色谱法对PMFs 物质进行提取分离，并使用LC-MS 在柚皮PMFs 中鉴定多种活性物质，柚皮PMFs 提取物中类黄酮化合物含量为73.64%。其中多甲氧基黄酮类物质有5 种分别为川陈皮素、橘皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、8-羟基-3,5,6,7,3',4'-六甲氧基黄酮和5-羟基-3,3',7,8-四甲氧基-4',5'-亚甲二氧基黄酮，含量分别为5.12%、4.29%、4.33%、4.10%和3.07%。
体外抗氧化实验表明，柚皮PMFs 对DPPH 和ABTS+自由基具有一定的清除能力，在一定的范围内存在量效关系，对AAPH 诱导红细胞溶血率有抑制作用。当PMFs浓度达到2.00 mg/mL时，对DPPH、ABTS+自由基清除率最大，分别为75.90%、78.85%；一定浓度的柚皮多甲氧基黄酮可以缓解AAPH诱导的红细胞氧化应激。油脂抗氧化试验表明，在测试时间内，柚皮PMFs 提取物可显著减缓高温下脂质的氧化速度。与空白组相比，质量分数为1.00%的柚皮PMFs 对油脂酸价和过氧化值降低有显著性差异，而质量分数0.50%的柚皮PMFs 抑制油脂茴香胺值有显著性差异。因此，研究和开发柚皮PMFs 物质成为合成抗氧化剂替代品，具有重要意义。
[1] 郭畅,傅曼琴,徐玉娟,等.沙田柚皮精油分子蒸馏分离及成分分析[J].现代食品科技,2018,34(6):260-266.
[2] 曾心悦,黄嘉泳,袁显和,等.梅州金柚柚皮膳食纤维的理化性质分析[J].现代食品科技,2020,36(4):73-81,303.
[3] 单杨,刘娟,王振,等.生物合成柑橘类黄酮研究进展[J].中国食品学报,2019,19(11):1-13.
[4] He B,Nohara K,Park N,et al.The small molecule nobiletin targets the molecular oscillator to enhance circadian rhythms and protect against metabolic syndrome [J].Cell Metabolism,2016,23(4): 610-621.
[5] 王彤,叶子茂,刘梦雨,等.多甲氧基黄酮在不同宽皮柑橘品种组织中的积累变化规律[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2021,47(6):729-735.
[6] 石敏,何春玫,胡金贵,等.柚皮中黄酮类化合物提取工艺研究进展[J].大众科技,2021,23(4):41-44.
[7] 赵梓燕.柑橘果实多甲氧基黄酮的提取、富集与分离纯化方法研究[D].重庆:西南大学,2018.
[8] 魏鑫悦,陈克保,关统伟.攀枝花黑松露多糖的抗氧化和降血糖活性[J].现代食品科技,2022,38(3):1-7.
[9] ZHANG Shilin,DΕNG Peng,XU Yuchao,et al.Quantification and analysis of anthocyanin and flavonoids compositions,and antioxidant activities in onions with three different colors [J].Journal of Integrative Agriculture,2016,15(9): 2175-2181.
[10] Huifan,Liuhui,et al.The variations,including structures and attenuation to hemolysis,of peptide purified from dendrobium aphyllum during in vitro gastro-intestinal digestion and caco-2 uptake and transportation [J].International Journal of Peptide Research and Therapeutics,2019,25(4): 1319-1331.
[11] 黄睿,沈淑妤,陈虹霖,等.柑橘类黄酮的生物学活性及提高生物利用度技术研究进展[J].食品科学,2019,40(1):319-326.
[12] 宋博.柑橘类黄酮PMFs 的生物节律紊乱调节能力及其机理研究[D].杭州:浙江大学,2021.
[13] 梁曾恩妮,苏瑾,付复华,等.柑橘类黄酮的抗炎机制研究进展[J].湖南农业科学,2020,3:113-116.
[14] 王景翔,于宏伟,胡瑞省.川陈皮素研究进展[J].安徽农业科学,2011,39(13):7731-7733.
[15] Sundaram R,Shanthi P,Sachdanandam P.Εffect of tangeretin,a polymethoxylated flavone on glucose metabolism in streptozotocin-induced diabetic rats [J].Phytomedicine,2014,21(6): 793-799.
[16] Lim S W,Lee D R,Choi B K,et al.Protective effects of a polymethoxy flavonoids-rich Citrus ɑurɑntium peel extract on liver fibrosis induced by bile duct ligation in mice [J].Asian Pacific Journal of Tropical Medicine,2016,9(12):1158-1164.
[17] Wu Y,Cheng C S,Li Q,et al.The application of Citrus folium in breast cancer and the mechanism of its main component nobiletin: a systematic review [J].Εvidence-Based Complementary and Alternative Medicine,2021,2021(73): 1-15.
[18] 潘红波,王衬衬,谢典,等.橘皮素药理作用及其机制研究进展[J].江西科技师范大学学报,2020,6:80-84.
[19] Li X,Xie P,Hou Y,et al.Tangeretin inhibits oxidative stress and inflammation via upregulating Nrf-2 signaling pathway in collagen-induced arthritic rats [J].Pharmacology,2019,104(3-4): 187-195.
[20] A Y M,A H T,A A S,et al.Regulation of adipocytokine secretion and adipocyte hypertrophy by polymethoxyflavonoids,nobiletin and tangeretin [J].Life Sciences,2011,88(13-14): 613-618.
[21] 任洪民,张金莲,罗雪晴,等.HPLC 法测定不同枳壳饮片中3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮的含量[J].时珍国医国药,2018,29(11):2604-2605.
[22] 胡燕飞,王长海.微波法提取陈皮中3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮及其含量测定[J].烟台大学学报(自然科学与工程版),2005,1:45-49.
[23] Vu T O,Tran P T,Seo W,et al.Flavonoids from the peels of Citrus unshiu Markov.and their inhibitory effects on RANKL-induced osteoclastogenesis through the downregulation of c-Fos signaling in vitro [J].Bioorganic Chemistry,2021,107(33): 104613.
[24] Min Jeong Kim,Hye Hyeon Lee,Min Jeong Seo,et al.Identification of 5-hydroxy-3,6,7,8,3',4'-hexamethoxyflavone from Hizikiɑ fusiforme involved in the induction of the apoptosis mediators in human AGS carcinoma cells [J].Journal of Microbiology and Biotechnology,2012,22(12):1665-1672.
[25] Ortega J T,Serrano M L,AI Suárez,et al.Methoxyflavones from Mɑrcetiɑ tɑxifoliɑ as HIV-1 reverse transcriptase inhibitors [J].Natural Product Communications,2017,12(11):1677-1680.
[26] Qiu P,Guan H,Ping D,et al.Hydroxylated polymethoxyflavones induce p53 and Bax dependent apoptosis and cell cycle arrest [J].The FASΕB Journal,2010,24: lb484-lb484.
[27] Huang R,Zhang Y,Shen S,et al.Antioxidant and pancreatic lipase inhibitory effects of flavonoids from different citrus peel extracts: An in vitro study [J].Food Chemistry,2020,326: 126785.
[28] 王谢祎.黄酮和黄酮醇结构特性、相互作用与抗氧化效应(协同、拮抗或加成)间的关系研究[D].南昌:南昌大学,2016.
[29] 贺萍,王倩,张猛猛,等.东革阿里多糖对红细胞氧化溶血的保护作用[J].现代食品科技,2019,35(6):30-38.
[30] 纳雨农,陈乃驿,张涣悠,等.金柚幼果黄酮对AAPH 诱导红细胞氧化损伤的保护作用[J].现代食品科技,2022,38(2):36-45,103.
[31] 向方桃,陈封政,陈建明,等.千里香中黄酮类成分的分离鉴定及抗氧化活性研究[J].天然产物研究与开发,2020,32(10):1683-1687.
[32] 高牡丹,师景双,胡明燕.用于测定芝麻酱、花生酱酸价、过氧化值的油脂提取方法研究[J/OL].中国油脂:1-9[2022-07-10].
[33] 林洁.柚子皮总黄酮对食用油脂的抗氧化作用[J].江苏农业学报,2020,36(4):1054-1059.
[34] 单杨,李高阳,李忠海.柑橘皮中多甲氧基黄酮的体外抗氧化活性研究[J].食品科学,2007,8:100-103.
[35] ZHOU Qi,JIA Xiao,DΕNG Qianchun,et al.Quality evaluation of rapeseed oil in Chinese traditional stir-frying [J].Food Science &Nutrition,2019,7(11): 3731-3741
[36] 栾霞,王瑛瑶,张蕊,等.油脂储藏过程中茴香胺值、过氧化值的变化研究[J].粮油加工,2009,12:77-79.